共聚焦顯微鏡比寬場(chǎng)顯微鏡具有更多的優(yōu)勢(shì)，共聚焦顯微鏡可以對(duì)樣品做連續(xù)光學(xué)切片并排除非焦平面的信號(hào)干擾，為此共聚焦顯微鏡的應(yīng)用也的確更為普遍。不過(guò)市面上各種各樣的共聚焦顯微鏡越來(lái)越多，要如何進(jìn)行選擇呢？
 

　　共聚焦顯微鏡比寬場(chǎng)顯微鏡具有更多的優(yōu)勢(shì)，共聚焦顯微鏡可以對(duì)樣品做連續(xù)光學(xué)切片并排除非焦平面的信號(hào)干擾，為此共聚焦顯微鏡的應(yīng)用也的確更為普遍。不過(guò)市面上各種各樣的共聚焦顯微鏡越來(lái)越多，要如何進(jìn)行選擇呢？在選擇共聚焦顯微鏡時(shí)，zui基本也zui重要的考慮因素主要有兩點(diǎn)：您想要研究的樣本類型(如：固定的細(xì)胞還是活細(xì)胞)，以及您想要進(jìn)行的檢測(cè)類型(如：靜態(tài)還是動(dòng)態(tài)細(xì)胞過(guò)程)。
 

　　固定細(xì)胞的共聚焦成像
 

　　要對(duì)固定且染色了的細(xì)胞或組織成像，我們一般選擇激光掃描共聚焦(LSCM)。這主要是因?yàn)楣潭ǖ乃兰?xì)胞缺乏活細(xì)胞中的快速生物學(xué)事件，能更好的受益于LSCM較高的空間分辨率。LSCM成像是通過(guò)激光對(duì)樣品進(jìn)行光學(xué)層切，掃描速度(取決于掃描陣鏡速度)一般為1fps。曝光時(shí)間越長(zhǎng)意味著光漂白的風(fēng)險(xiǎn)越大，但對(duì)于固定的死細(xì)胞，時(shí)間并不是很關(guān)鍵，我們可以通過(guò)拍多張圖片來(lái)平均。
 

　　活細(xì)胞的共聚焦成像
 

　　成像活細(xì)胞需要額外的保護(hù)，以免不友好環(huán)境的干擾。在成像時(shí)，我們首先需要考慮的是保持細(xì)胞的活性和健康，恒溫加熱元件和灌流系統(tǒng)是的，尤其對(duì)于進(jìn)行time-lapse(時(shí)間序列)的研究來(lái)說(shuō)。控制活細(xì)胞生理狀態(tài)的快速生化事件是大多數(shù)人zui想要研究的，但這些事件對(duì)于傳統(tǒng)LSCM來(lái)說(shuō)太快了。此外，LSCM的長(zhǎng)時(shí)間曝光還會(huì)引發(fā)毒性光照損傷細(xì)胞。因此，對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行成像會(huì)需要特殊的共聚焦顯微鏡。
 

　　對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行共聚焦成像一般有兩個(gè)選擇：快速掃描的激光掃描共聚焦和轉(zhuǎn)盤共聚焦。快速掃描共聚焦顯微鏡用較快的共振掃描陣鏡(resonantscanningmirrors)取代較慢的galvanometersmirrors，能使掃描速度達(dá)到30fps；而轉(zhuǎn)盤共聚焦(SDCMs)的優(yōu)勢(shì)在于掃描速度更快(雖然不可避免的要損失空間分辨率)，其速度理論上可達(dá)到2000fps(實(shí)際上往往受到其他因素的限制)。
 

　　如果您擔(dān)心光漂白或者很弱的熒光信號(hào)，那么SDCM可能更加適合。SDCM采用兩個(gè)帶有陣列微孔的轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動(dòng)來(lái)分散激發(fā)光，不同于LSCM對(duì)樣品進(jìn)行點(diǎn)掃描，SDCM一次采集多個(gè)點(diǎn)(大約100個(gè)像素點(diǎn))，因而速度大大增加，并且SDCM的光漂白及光毒性更小。不過(guò)，您也可以采用快速掃描共聚焦來(lái)提高掃描速度，配合高靈敏檢測(cè)器，降低激發(fā)光能量來(lái)減少光毒性，這樣能夠保證傳統(tǒng)共聚焦的豐富功能。